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Desarrollo de nuevos procedimientos para caracterizar in vitro e in vivo rutas bioquímicas alteradas en cáncer de mama mediante perfiles metabolómicos obtenidos por espectroscopía de RMN

84000.00
Proyecto dirigido por:
Inés Domingo

El objetivo del presente proyecto es la optimización de una nueva metodología para profundizar en los mecanismos moleculares involucrados en cáncer de mama (CM). Para este fin se aplicará un nuevo enfoque, el análisis metabolómico de alta resolución a nivel organular y molecular. La metabolómica, una aproximación experimental relativamente reciente comprende el análisis del conjunto de todos los metabolitos presentes en un determinado compartimento biológico y se ha aplicado con éxito en diversos tipos de enfermedades, incluyendo procesos neoplásicos. En los últimos años se han llevado a cabo diversos estudios metabolómicos en CM, identificando moléculas características de esta patología.

Sin embargo, todavía existe la necesidad de afinar la metodología empleada en el análisis para entender cómo estos cambios metabólicos están relacionados con el mecanismo de la enfermedad. Por tanto, el objetivo principal de este proyecto es la puesta a punto de la metodología para el análisis metabolómico de muestras de CM para conocer mejor los mecanismos moleculares implicados en el desarrollo de esta enfermedad. El proyecto se realizará primero en modelos de cáncer de mama celular in vitro, seguido de modelos de ratón y, finalmente, con muestras de tejido humano. Para afinar el análisis metabolómico proponemos enfocar el estudio a nivel molecular de orgánulos y del análisis de tumores en 3D. Por tanto, el análisis se llevará a cabo no solo de la célula madre completa sino también de la mitocondria, un orgánulo que juega un papel central en el metabolismo. Además, dado la heterogeneidad metabolómica dentro de un mismo tumor, se analizarán las alteraciones en diferentes regiones del tumor.

Y, por último, se perfeccionará la interpretación de los resultados mediante el marcaje isotópico de algunos metabolitos para identificar en qué rutas están involucrados. Por tanto, la estrategia que se llevará a cabo en este proyecto estará basada en la combinación del aislamiento y estudio del perfil metabolómico de la fracción mitocondrial de células y tejidos de CM, el estudio fluxómico mediante el marcaje isotópico de las muestras y el análisis de muestras de tejido intactas mediante la espectroscopía de RMN HR-MAS (High-Resolution Magic-Angle Spinning).